一、通道數(shù)選擇:實驗需求與擴展性的平衡
基礎需求匹配
單通道至四通道:適用于常規(guī)基因表達分析、病原體檢測(如新冠、HPV分型),例如LightCycler96的四通道設計可覆蓋FAM/VIC/ROX/Cy5等常用染料組合。
五通道及以上:支持高復雜度多重PCR(如同時檢測5種以上靶標),需結合儀器是否支持卡夾式光路設計(如QuantStudio™5的6通道系統(tǒng),可通過擴展卡夾實現(xiàn)通道升級)。
未來擴展性
選擇模塊化通道設計(如Bio-RadCFX96的4通道系統(tǒng)),避免一次性投入過高成本。
優(yōu)先選擇兼容主流熒光染料(FAM/HEX/ROX/Cy5)的儀器,減少染料適配成本。
二、檢測靈敏度:核心參數(shù)與實驗場景的適配
靈敏度指標
單拷貝檢測能力:如Archimed系列可檢測1拷貝基因,適用于低豐度靶標(如ctDNA、病毒載量監(jiān)測)。
分辨率:1.33倍至1.5倍的拷貝數(shù)差異檢測能力,滿足腫瘤MRD評估、基因突變篩查等高精度需求。
靈敏度優(yōu)化技術
溫控系統(tǒng):±0.25℃的溫控精度(如QuantStudio™5)可減少非特異性擴增,提升低濃度樣本信號穩(wěn)定性。
光學系統(tǒng):采用菲涅爾透鏡或高強度固態(tài)光源(如LightCycler96的白光LED),增強熒光信號采集效率。
三、選型決策樹
常規(guī)實驗:四通道+單拷貝靈敏度(如LightCycler96),覆蓋基因表達、SNP分型。
復雜多重PCR:五通道及以上+高分辨率(如QuantStudio™5),支持腫瘤多靶標檢測。
超敏檢測:六通道+單拷貝靈敏度(如Archimed系列),適用于液體活檢、病原體低載量監(jiān)測。
結論:選型需結合實驗復雜度、樣本豐度及預算,優(yōu)先選擇通道可擴展、靈敏度可驗證的儀器,并通過預實驗驗證實際性能。